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          高胰島素和高血糖對糖尿病患者IGF2BP2基因表達的影響

          2019-03-05 圍觀 : 評論 論文發表
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          龔琳,劉佳,衛興國,曹瑩

          高胰島素和高血糖對<a href=http://www.kxyqm.com/tags-%E7%B3%96%E5%B0%BF%E7%97%85%E8%AE%BA%E6%96%87-0.html target=_blank class=infotextkey>糖尿病</a>患者IGF2BP2基因表達的影響

          [摘要] 目的 研究胰島素量與血糖量對1型和2型糖尿病的患者IGF2BP2基因表達的影響。方法 自白細胞提取總mRNA,作為模板進行反轉錄得到cDNA,以Real-Time PCR方法測定目的基因的表達量。 結果 測定了18例Ⅰ型糖尿病患者、25例2型糖尿病患者和20名正常人中的IGF2BP2基因表達量。 結論 該研究在Ⅰ型和2型糖尿病的患者、正常人群中測定了IGF2BP2基因的表達量水平,發現胰島素值低、血糖高的1型糖尿病組的IGF2BP2基因表達正常,胰島素與正常組無差異、血糖高的2型糖尿病組IGF2BP2基因高表達,推測胰島素值、血糖值與IGF2BP2基因無直接聯系,但是IGF2BP2可能與胰島素抵抗有關。

          [關鍵詞] IGF2BP2基因;胰島素;血糖

          [中圖分類號] R587.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-4062(2017)04(b)-0024-02

          [Abstract] Objective To research the effect of insulin dose and blood glucose dose on the IGF2BP2 gene expression of type 1 diabetes patients and type 2 diabetes patients. Methods The total mRNA was extracted by white cell as templets for reverse transcription thus obtaining cDNA, and the expression level of target gene was measured by the Real-Time PCR method. Results The IGF2BP2 gene expression levels of 18 cases of patients with type 1 diabetes, 25 cases of patients with type 2 diabetes and 20 cases of normal people were measured. Conclusion The measurement shows that the IGF2BP2 gene expression in the type 1 diabetes group with low insulin value and high blood glucose is normal, and there is no difference in the insulin compared with the normal group thus speculating that the insulin value, blood glucose value have no direct correlation with the IGF2BP2 gene, but the IGF2BP2 may be related to the insulin resistance.

          [Key words] IGF2BP2 gene; Insulin; Blood glucose

          近年來,隨著平均壽命延長,生活習慣和飲食結構變化,國人糖尿病的發病率逐年增加。近10年來,通過常見病與候選基因關聯各種研究,研究人員發現了一些和糖尿病發病率增加密切相關的具有多態性的基因[1],其中就包括IGF2BP2(胰島素樣生長因子2結合蛋白2),在不同類型糖尿病患者中,IGF2BP2基因的表達量有很大差異。因此,在各常見類型糖尿病的患者和正常人中,該研究對IGF2BP2基因的表達量進行測定,研究IGF2BP2基因表達量水平與胰島素量、血糖量的聯系,以期在基因水平對各型糖尿病的發生機制進行了探索,現報道如下。

          1 材料與方法

          1.1 材料

          樣本由長沙市第四醫院提供,為臨床確診的Ⅰ型、2型糖尿病患者血樣,已征得本人同意。正常人血樣采自非糖尿病的捐獻者。以常規抽血檢驗的方法檢測的空腹胰島素(FINS) 和空腹血糖量(FPG),核算胰島素抵抗值,胰島素抵抗值計算公式為:HOMA-IR = FPG×FINS/22.5。

          1.2 試劑與儀器

          PCR產物純化試劑盒、Trizol Reagent、RNase、Oligo dT(Invitrogen公司產品);Power SYBR Green PCR Master Mix、Taqman Universal PCR Master Mix試劑盒(ABI公司產品);Sensiscript RT試劑盒(QIAGEN公司產品);其余反應中所用試劑均為分析純。實時熒光定量PCR儀(ABI公司產品)。

          1.3 引物和探針設計

          引物為5-CACCGGAAGCCCAGTTCAA-3和 5-CCACCTTTGCCAATCACCC-3;探針序列為5-TGAAGCTGGAAGCGCATATCAGAG-3。引物和探針皆由上海生工生物工程技術公司合成。

          1.4 樣本總RNA提取

          取血樣2~3 mL,使用Trizol Reagent提供的方法提取血液中白細胞的總RNA,提取的RNA含量用紫外分光光度儀進行測定,OD260/280在1.8~2.0之間,-80℃保存待使用。

          1.5 樣本cDNA合成

          取0.2 μg樣本總RNA與Sensiscript RT 試劑盒中逆轉錄試劑進行反應;將反應體系都放在37℃孵育60 min,生成的cDNA置于-20℃保存待使用。

          1.6 樣本IGF2BP2基因表達量的檢測

          以樣本總cDNA作為模板,按照Taqman Universal PCR Master Mix試劑盒說明備好反應體系,在ABI Prism 7300實時熒光PCR儀中進行反應,測定樣本中IGF2BP2基因表達量。通過反應物梯度稀釋和Real-Time PCR構建基因定量標準曲線,通過標準曲線對樣本中的IGF2BP2基因表達量進行確定。每次測定時,待測基因均與持家基因GAPDH同時進行反應,以確保數據的可信性。

          1.7 統計方法

          該課題中,以IGF2BP2基因的表達量/GAPDH的表達量作為目的基因的表達量。利用SPSS 10.0統計學軟件進行分析,3組數據差異的比較采用單因素方差分析;P<0.05為差異有統計學意義。

          2 結果

          Ⅰ型、2型糖尿病患者數據都是與正常對照組比較,Ⅰ型糖尿病組的空腹胰島素值顯著低于正常組(P<0.05),2型糖尿病組均值高于正常組,但是差異無統計學意義。Ⅰ型、2型糖尿病患者的空腹血糖值顯著高于正常對照組(P<0.05)。利用實時熒光定量PCR方法來測定IGF2BP2基因在樣本中的表達量,并使用持家基因GAPDH進行校正,2型糖尿病組的IGF2BP2基因相對表達量顯著高于對照組,Ⅰ型糖尿病組未見表達量增高(見表1)。綜合3組數據,可以看出僅2型糖尿病患者IGF2BP2基因表達量增加,這一現象與胰島素量和血糖量并無直接對應關系。核算了各組的胰島素抵抗值,2型糖尿病組胰島素抵抗值顯著增高于另外兩組,其均值為正常組的2.56倍,IGF2BP2基因相對表達量也高于Ⅰ型糖尿病組和正常組,推測兩者可能具有相關性。

          3 討論

          極少數特殊類型的糖尿病是單基因疾病,但大部分2型糖尿病是與胰島素抵抗和B細胞分泌障礙而導致高血糖的復雜多基因病,其發病機制至今未完全闡明。遺傳因素在2型糖尿病的產生中起重要作用,但同時還受到諸多環境因素影響。2型糖尿病是種復雜多基因疾病,具備多基因病的特點——參與發病的遺傳因素為多個,每個基因對發病影響大小不同,大多數基因作用小;疾病的最終發生是各基因作用的綜合結果[2]。IGF2BP2也是2型糖尿病的相關基因之一,經過該課題組實驗,2型糖尿病患者的IGF2BP2基因表達量高于正常對照組,Ⅰ型糖尿病患者的該基因卻表達不高,經過檢測,發現胰島素值低、血糖高的Ⅰ型糖尿病組IGF2B P2基因表達正常,胰島素與正常組無差異、血糖高的2型糖尿病組IGF2BP2基因高表達,推測胰島素值、血糖值與IGF2BP2基因無直接正相關或者負相關,但是不管哪一組,胰島素抵抗值卻和IGF2BP2基因表達量同升同降,可能存在一定的聯系。

          然而,除了遺傳易感性,環境因素在2型糖尿病發病中的作用也不小。很多臨床研究顯示,飲食控制、加強運動、控制體重可以使糖尿病得以預防或延緩發展[3]。遺傳因素決定個人的疾病易感性,而環境因素則可促發糖尿病。因此,來自臨床的患者在進行基因檢驗時無法排除每個人不同環境因素的影響,課題組擬用可排除環境因素影響的糖尿病模型動物或者胰島素抵抗的細胞株進一步探索IGF2BP2基因表達和胰島素的聯系。

          [參考文獻]

          [1] Rong R,Hanson RL,Ortiz D,et al.Association analysis of variation in/near FTO, CDKAL1, SLC30A8, HHEX, EXT2, IGF2BP2, LOC387761, and CDKN2B with type 2 diabetes and related quantitative traits in Pima Indians[J].Diabetes, 2009,58(2):478-488.

          [2] 高靜,段暢,李麗娟.2型糖尿病發病機制的研究進展[J].醫學綜述,2015(21):3835-3938.

          [3] 牛潔,劉銅華,楊麗霞.環境因素在2型糖尿病發生中的作用[J].中國慢性病預防與控制,2008,16(4):440-442.

          (收稿日期:2017-01-19)

          《高胰島素和高血糖對糖尿病患者IGF2BP2基因表達的影響》刊發于《糖尿病新世界》學術期刊,2017年8期 ,作者:龔琳,劉佳,衛興國,曹瑩。

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